NC转印膜、PVDF转印膜、正电荷尼龙转印膜的优缺点对比
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| 目录 |
| 1、什么是Western Blot 2、NC转印膜、PVDF转印膜、正电荷尼龙转印膜的优缺点对比 3、迈博瑞转印膜推荐 |
一、什么是Western Blot
就像与SDS提供的电荷结合一样，蛋白质可以在电场中从凝胶转移到坚固的载体上，即从凝胶中“印迹”到膜。这种方法被称为蛋白免疫印迹转印。
蛋白免疫印迹法中蛋白从凝胶转印到膜上
转膜方式主要有两种：湿转和半干转。两者原理相同，只是用于固定胶/膜叠层及施加电场的仪器有不同。半干转耗时短，但是更适合小分子蛋白的转印，而湿转蛋白分子量范围较宽，在Western Blot实验中，常用的是湿转。
二、NC转印膜、PVDF转印膜、正电荷尼龙转印膜的优缺点对比
在蛋白质和核酸的转移和检测过程中，我们都常用的转印膜有三种：正电荷尼龙转印膜/硝酸纤维素NC转印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF转印膜。不同的转印膜规格和参数不同。选择正确、均一稳定的转印膜对达到最佳的实验结果起到关键性作用。
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PVDF转印膜 |
NC转印膜 |
正电荷尼龙转印膜 |
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机械强度高、质地柔韧、易于保存 |
极易破碎不易操作 |
高的灵敏度和 |
在蛋白免疫印迹法中，可根据靶蛋白分子大小选择0.2 µm或0.45 µm孔径的膜。在大多数应用中，PVDF和硝酸纤维素是等效的。请注意，PVDF的容量高于硝酸纤维素，但需要更仔细的预处理：根据凝胶大小将膜切割成适当大小，通常比凝胶稍大一点；在甲醇中浸泡约30秒；在ddH2O中清洗约1分钟，然后在冰冷的转印缓冲液中孵育5分钟。凝胶还需要在冰冷的转印缓冲液中平衡3-5分钟。
三、迈博瑞转印膜推荐
MS®转印膜主要是参与Southern印迹杂交和Northern印迹杂交实验，用于实现基因诊断，通常都是将杂交结果转移到印记膜上，作为最终判断依据。印迹膜有多种形式：0.2um和0.45um的PVDF转印膜、硝酸纤维素转印膜、（Nylon66）尼龙转印膜，这是一种经验证的western 杂交介质，PVDF用于高载量免疫印迹和蛋白测序。
| 名称 | 湿润性 | 灵敏度和分辨率 | 背景 | 机械强度 | 溶剂耐受性 | 水润性 | 蛋白结合能力 | 适用染色方法 | 检测方式 |
| Nylon66印迹膜 | 亲水性 | 高 | 较高 | 软而结实 | 较差 | 缓冲溶液润湿 | >400μg/cm2 | 不能用阴离子染料 | 不能用阴离子染料，受限制 |
| NC转印膜 | 亲水性 | 高 | 低 | 干的NC膜易脆 | 差 | 缓冲溶液润湿，避免气泡 | 80-110μg/cm2 | 胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁 | 常规染色，可用放射性和非放射性检测 |
| PVDF转印膜 | 疏水性 | 高 | 浅 | 机械强度高 | 好 | 100%的甲醇润湿 | 125-200μg/cm2 | 胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁、考马斯亮兰 | 常规染色，较于NC膜可用考马斯亮蓝染色，ECL检测和快速免疫检测 |
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